Le gène PIG-A, nouveau marqueur de mutagenèse : Preuves de concept et exposé de la technique

Abstract

Les tests de mutagenèse actuels ne permettent pas la détection directe des mutations géniques chez l’homme et nécessitent souvent une étape préalable de culture cellulaire. Le test PIG-A sur sang total est fondé sur la mesure de la fréquence de mutation du gène sentinelle PIG-A par la révélation par cytométrie en flux de cellules circulantes déficientes en ancre GPI (glycosyl-phosphatidyl-inositol). Il consiste à identifier les cellules mutées pour le gène PIG-A après marquage des cellules par des fluorochromes spécifiques de l’ancre GPI ou des protéines qui lui sont associées. Les dernières avancées ont permis d’améliorer la sensibilité et le débit d’analyse. Les résultats de ce biomarqueur d’effet nouveau et prometteur, réalisable chez l’homme ou le rongeur, sont désormais disponibles en moins de deux heures après le prélèvement.

Gene mutations are not directly detected by current genotoxicity assays and most of them need a cell culture step. The whole blood PIG-A assay consists in the detection of the mutation frequency within the PIG-A sentinel gene by identification of glycosyl-phosphatidyl-inositol (GPI-) deficient cells. PIG-A mutated/GPI-deficient cells can be detected by flow cytometry as they no longer express surface fluorescence for GPI-linked markers. The last researches have focused on cell enrichment techniques leading to increased throughput and sensitivity. The results of this new and promising biomarker of mutagenesis, performed in humans or rodents, are now available within 2 hours after blood collection.